L'aspirato del midollo osseo aiuta nel trattamento delle ferite non guaritrici.

È stata condotta una sperimentazione clinica dell'efficacia dell'aspirato midollare come mezzo per il trattamento delle lesioni da ferita non cicatrizzate. Conducendo l'approvazione di questo metodo di trattamento, gli scienziati hanno fatto affidamento sull'effetto immunomodulatore, sulla stimolazione della rigenerazione dei tessuti e sull'ematopoiesi.

L'aspirato è stato ottenuto aspirando il midollo osseo dall'ileo del paziente ed è stato applicato direttamente sulla superficie della ferita. Sono stati ottenuti risultati incoraggianti: durante la settimana la superficie della ferita è stata ridotta di oltre il 50%, è stata osservata la stimolazione dell'epitelizzazione e della vascolarizzazione, le ferite sono state eliminate dagli elementi necrotici, che era importante per la guarigione della ferita. Gli autori osservano che questa tecnica ha un grande futuro, ma sono necessari ulteriori studi clinici su un significativo contingente di pazienti.

L'aspirato del midollo osseo aiuta nel trattamento delle ferite non guaritrici.

È stata condotta una sperimentazione clinica dell'efficacia dell'aspirato midollare come mezzo per il trattamento delle lesioni da ferita non cicatrizzate. Conducendo l'approvazione di questo metodo di trattamento, gli scienziati hanno fatto affidamento sull'effetto immunomodulatore, sulla stimolazione della rigenerazione dei tessuti e sull'ematopoiesi.

L'aspirato è stato ottenuto aspirando il midollo osseo dall'ileo del paziente ed è stato applicato direttamente sulla superficie della ferita. Sono stati ottenuti risultati incoraggianti: durante la settimana la superficie della ferita è stata ridotta di oltre il 50%, è stata osservata la stimolazione dell'epitelizzazione e della vascolarizzazione, le ferite sono state eliminate dagli elementi necrotici, che era importante per la guarigione della ferita. Gli autori osservano che questa tecnica ha un grande futuro, ma sono necessari ulteriori studi clinici su un significativo contingente di pazienti.

Aspirazione del midollo osseo

Qual è l'aspirazione del midollo osseo?

L'aspirazione del midollo osseo è una procedura che consiste nel prelevare un campione dal tessuto molle all'interno delle ossa. Il midollo osseo è un tessuto spugnoso trovato all'interno delle ossa. Contiene cellule che producono globuli bianchi, globuli rossi e piastrine in ossa più grandi, come:

I leucociti aiutano a combattere le infezioni. Gli eritrociti trasportano ossigeno e sostanze nutritive. Le piastrine possono ispessire il sangue.

Se un esame emocromocitometrico completo indica che il numero o la funzione dei globuli rossi, dei leucociti o delle piastrine è anormalmente alto o basso, il medico potrebbe voler esaminare il midollo osseo per determinare la causa. L'aspirazione del midollo osseo viene spesso eseguita con una biopsia del midollo osseo che utilizza un diverso tipo di ago per rimuovere il tessuto dal midollo osseo.

Perché viene eseguita l'aspirazione del midollo osseo?

Numerose condizioni sono associate al midollo osseo malsano. Se le tue analisi del sangue preliminari mostrano bassi livelli di globuli bianchi o di globuli rossi, il medico può prescrivere un'aspirazione del midollo osseo. Il test viene utilizzato per controllare la malattia e per monitorare la progressione o il trattamento di una specifica malattia.

Le condizioni e le malattie associate ai problemi del midollo osseo includono:

  • anemia, che è il numero di globuli rossi
  • malattie del midollo osseo, come la mielofibrosi o la sindrome mielodisplastica
  • cellule del sangue come leucopenia o policitemia
  • cancro del midollo osseo o sangue come la leucemia o linfoma emocromatosi
  • , che è una malattia genetica in cui il ferro si forma nel sangue
  • , specialmente malattie croniche come la tubercolosi
  • malattie da accumulo come l'amiloidosi o la malattia di Gaucher

L'aspirazione del midollo osseo può anche essere un test importante se si dispone di un trattamento contro il cancro. Questo può aiutare a determinare se il tumore si è diffuso all'osso.

Quali sono i rischi associati all'aspirazione del midollo osseo?

Gli esami del midollo osseo sono sicuri, ma tutte le procedure mediche comportano qualche tipo di rischio. In rari casi, sono possibili le seguenti complicanze:

  • reazione allergica all'anestesia
  • sanguinamento eccessivo
  • un'infezione
  • disagio a lungo termine

I rischi sono rari e sono più spesso associati a condizioni che causano un sistema immunitario indebolito o un basso numero di piastrine. Un sistema immunitario indebolito può renderti più suscettibile alle infezioni e un basso numero di piastrine aumenta il rischio di sanguinamento eccessivo.

Come prepararsi per l'aspirazione del midollo osseo

Devi dire al tuo medico di eventuali farmaci che potresti assumere, compresi farmaci da banco (over the counter) o supplementi nutrizionali, ma devi anche dire loro di eventuali allergie che hai. Il medico potrebbe chiederti di interrompere l'assunzione di determinati farmaci prima della procedura. Ma non dovresti interrompere l'assunzione di farmaci a meno che il tuo medico non ti dica questo.

Dillo al tuo medico se sei nervoso per la procedura. Possono darti un lieve sedativo che ti aiuterà a seguire la procedura.

Seguire le istruzioni del medico prima della procedura.

Come viene eseguita l'aspirazione del midollo osseo

Ti verrà chiesto di cambiare gli indumenti dell'ospedale e di sdraiarti su un fianco o sullo stomaco. Il tuo corpo sarà coperto con un panno, in modo che solo l'area di studio sarà visibile.

Il medico controllerà la frequenza cardiaca e la pressione sanguigna prima dell'aspirazione del midollo osseo.

Prima della procedura, ti verrà data l'anestesia locale per stordire l'area in cui avverrà l'aspirazione. Questo di solito è nella parte superiore della parte posteriore dell'articolazione dell'anca. A volte può essere preso dal petto.

Il medico eseguirà una piccola incisione che renderà più facile l'infiltrazione di aghi cavi nella pelle. L'ago entra quindi nell'osso. Il medico usa una siringa sul retro dell'ago per estrarre la parte liquida del midollo osseo.

Subito dopo la procedura, l'incisione sarà fasciata e andrai in un'altra stanza per riposare prima di andare a casa.

Dopo l'aspirazione del midollo osseo

Potresti provare un po 'di dolore dopo una settimana dalla procedura. Di solito puoi somministrarlo con antidolorifici OTC. Dovrai anche occuparti della ferita dell'incisione. È necessario mantenere la ferita asciutta per 24 ore dopo la procedura.

Mentre ti prendi cura della tua ferita, il tuo campione di midollo osseo viene inviato a un laboratorio per il test. Il medico esaminerà i risultati del test durante una riunione di follow-up.

Esame microscopico dell'aspirato del midollo osseo per i disturbi maligni dell'ematopoiesi - un confronto tra due metodi per preparare le diapositive

L'esame microscopico degli aspirati del midollo osseo è richiesto durante la diagnosi di molti disturbi neoplastici ematopoietici. Nel 2008, il Comitato internazionale per la standardizzazione dell'ematologia ha raccomandato l'utilizzo di due tipi di vetrini per la valutazione microscopica del midollo osseo: una pellicola a forma di cuneo e vetrini per la frantumazione del film. Dal momento che questi metodi non sono stati ancora confrontati, abbiamo effettuato un simile confronto. Sono stati valutati campioni normali di midollo osseo da 250 pazienti diagnosticati a causa di vari disturbi ematologici neoplastici. Le principali differenze tra i due metodi comparati sono state riscontrate in 13 pazienti con linfoma non-Hodgkin, sette pazienti con mastocitosi sistemica e 11 pazienti con leucemia acuta o sindromi mielodisplastiche o con leucemia mielomonocitica cronica. Le differenze sono state osservate anche in molti pazienti con mieloma multiplo, ma il significato clinico di queste discrepanze era piuttosto modesto. Le principali ragioni delle differenze osservate, apparentemente, erano la diluizione del midollo osseo con il sangue e la crescita focale di molte cellule neoplastiche. Crediamo che la tecnica della cotta sia più redditizia rispetto ai film con estensione a cuneo. Pertanto, si consiglia di utilizzare film di frantumazione come metodo principale per stabilire diagnosi o prendere decisioni terapeutiche basate sull'esame microscopico del midollo osseo.

L'esame microscopico del midollo osseo rimane una delle procedure diagnostiche chiave in ematologia. Secondo le ultime raccomandazioni relative alla diagnosi di neoplasie maligne del midollo osseo e del sistema linfatico dell'Organizzazione Mondiale della Sanità (OMS), l'importanza dell'esame microscopico del midollo osseo non è diminuita; piuttosto, sono stati determinati criteri morfologici più precisi, quando necessario, per evitare ambiguità.

Per molte malattie sono stati trovati marcatori immunologici o molecolari più specifici che, rispetto all'esame microscopico, consentono una valutazione molto più accurata del numero di cellule atipiche. Tuttavia, tali marcatori non sono disponibili per tutte le malattie e l'esame microscopico rimane l'unico metodo principale di diagnosi e monitoraggio della terapia in corso. Inoltre, per le malattie in cui la diagnosi si basa su metodi genetici o immunofenotipizzazione, sono necessari esami microscopici periodici del midollo osseo per verificare rapidamente le varie manifestazioni dello stato di trasformazione o i cambiamenti displastici secondari. La classificazione dell'OMS stabilisce aspettative molto elevate per i citologi, poiché la diagnosi finale si basa spesso su percentuali correttamente calcolate della composizione delle cellule del midollo osseo. Nella nostra pratica clinica, le valutazioni dell'aspirazione del midollo osseo nello stesso paziente, eseguite in diversi laboratori, hanno dato risultati diversi, sebbene ciascuna valutazione sia stata effettuata di conseguenza. Queste differenze sono state principalmente causate dall'esistenza di due metodi di preparazione del vetrino. Il Comitato internazionale di standardizzazione dell'ematologia (ICSH) raccomanda l'uso di due tipi di vetrini per la valutazione microscopica del midollo osseo: una pellicola a forma di cuneo (tecnica 1) e una pellicola di paglia (tecnica 2) diapositive [1]. I due metodi sopra menzionati non sono stati ancora confrontati in termini di rilevanza per la diagnosi e il monitoraggio in pazienti con disturbi ematologici. Lo scopo di questo studio era di confrontare i metodi di propagazione a cuneo e frantumazione del film e determinare quale fosse più adatto per diagnosticare e / o monitorare specifici gruppi di disturbi ematologici.

Sono stati raccolti campioni di midollo osseo da 250 pazienti diagnosticati e trattati presso il Dipartimento di Ematologia e Transplantologia dell'Università Medica di Danzica. Gli aspirati di midollo osseo sono stati prelevati dalla colonna ileale posteriore secondo le raccomandazioni ICSH [1]. Sono stati analizzati solo aspirati di midollo osseo contenenti particelle. Gli effluenti di ciascun campione di midollo osseo sono stati preparati utilizzando entrambe le tecniche dallo stesso specialista per non più di 20 minuti dopo l'aspirazione. Nella tecnica 1, il campione è stato spalmato su un vetrino utilizzando il bordo di un altro bicchiere, mentre nella tecnica 2, le particelle sono state compresse tra due vetrini. Dopo la colorazione con il metodo May-Grunwald-Giems, i vetrini sono stati sottoposti all'esame microscopico secondo le linee guida ICSH [1]. Nei vetrini ottenuti secondo il metodo 1, un numero differenziale di cellule embrionali è stato eseguito nelle aree immediatamente di fronte alle particelle del midollo osseo. Nei vetrini ottenuti con il metodo 2, solo le cellule del midollo osseo ben distribuite sono state analizzate attorno alle particelle del midollo osseo. Sono state escluse aree con un numero significativo di cellule danneggiate. La densità delle cellule del midollo osseo è stata valutata con un aumento di × 100 e × 400 ed è stata descritta come: aplastica, molto bassa, bassa, media, alta o aumentata. Gli stessi aumenti sono stati utilizzati per stimare il numero di megacariociti descritti di seguito: assenza di megacariociti, un numero molto piccolo di megacariociti, un numero basso, medio, alto o molto alto di megacariociti. Quindi nelle aree selezionate è stato effettuato il conteggio delle cellule differenziali con un numero di nucleotidi (figura 1). Sono state contate almeno 1000 celle. Le cellule sono state identificate in conformità con gli standard generalmente accettati [2-4]. Le valutazioni quantitative di singole linee cellulari sono state eseguite con un aumento di × 500 e × 1000. Secondo le raccomandazioni dell'OMS, i cambiamenti displastici sono stati valutati qualitativamente in 200 cellule di eritropoiesi e granulopoiesi e in 30 megacariociti (ove possibile) [5]. Per ciascun paziente, i vetrini preparati utilizzando entrambe le tecniche sono stati confrontati e valutati, e in ciascun caso è stato fatto un tentativo per analizzare le ragioni di eventuali differenze potenziali. Al fine di evitare qualsiasi pregiudizio associato alle valutazioni fatte da diversi operatori, tutti gli esami microscopici sono stati effettuati alla cieca dalla stessa persona. 1 striscio di midollo osseo preparato utilizzando le tecniche 1 (a) e 2 (b) con ingrandimento × 100 (parte superiore di ogni immagine) e ingrandimento × 400 (parte inferiore di ogni immagine)

La distribuzione della maggior parte delle variabili era anormale (test di Kolmogorov-Smirnov, p 5%, indicante una mancanza di remissione citologica, è stato diagnosticato in 12 pazienti quando sono stati valutati i vetrini preparati usando il metodo 2 e solo 7 pazienti per i vetrini preparati utilizzando 1. Nonostante la mancanza di un chiaro aumento delle cellule di esplosione nei vetrini ottenuti usando la tecnica 1, è stato indicato un aumento significativo della tecnica 2 in vetrini di cinque pazienti. Tabella 5. Tabella 5 Differenze clinicamente significative nella percentuale di cellule di dominio negli aspirati di midollo osseo prelevati da pazienti con terapia trattata con AL

L'esame microscopico del midollo osseo rimane a lungo una delle procedure diagnostiche più importanti in ematologia. Pertanto, è molto importante sapere che durante l'esame possono essere rilevati risultati diagnostici caratteristici di varie patologie, a seconda del metodo di preparazione del vetrino utilizzato. Sebbene abbiamo evidenziato alcune differenze che sembrano dipendere dalla tecnica di preparazione dello slide utilizzata in tutti i gruppi di malattie neoplastiche ematopoietiche, non tutte erano clinicamente significative. Ad esempio, indipendentemente dalla tecnica utilizzata, l'infiltrazione linfocitica era diagnostica per B-CLL. Tuttavia, nella maggior parte dei restanti gruppi di disturbi, i valori critici hanno differenze tra i risultati rivelati dall'esame microscopico, a seconda del metodo utilizzato.

La valutazione dell'infiltrazione linfocitica nel linfoma non-Hodgkin è sempre difficile per l'esame microscopico del midollo osseo per almeno due ragioni. Innanzitutto, l'infiltrazione del midollo osseo è spesso focale; in secondo luogo, alcune cellule linfoma provenienti dal sistema linfatico periferico possono spostarsi nel midollo osseo con il sangue, a volte suggerendo infiltrazioni in misura limitata. Il confronto ha mostrato che il metodo 2 era più utile per valutare l'infiltrazione del midollo osseo da processi linfoproliferativi, principalmente caratteristiche focali, che è coerente con le raccomandazioni pubblicate [1]. La conclusione delle diapositive ottenute con questo metodo si correlava meglio con i risultati dello studio delle biopsie del trefolo. La tecnica 2 causa alcune difficoltà di interpretazione, specialmente quando nel midollo osseo sono presenti aggregati linfocitari benigni, che possono comparire sia nel midollo osseo normale che nel midollo osseo interessato dal processo infiammatorio. Tali aggregati possono variare di dimensioni, sono ben differenziati dalle cellule ematopoietiche circostanti e consistono principalmente di numerosi linfociti maturi con diverse cellule linfoidi, istiociti, plasmacellule e macrofagi situati tra i linfociti. La frequenza degli aggregati linfoidi presenti negli aspirati del midollo osseo solitamente non supera il 20%; tuttavia, gli esami autoptici li hanno mostrati nel 62% delle biopsie [6, 7]. La composizione delle cellule di un tale aggregato di cellule linfoidi può spesso indicare la loro natura. Un'alta percentuale di forme linfoidi più o meno polimorfiche, piuttosto che linfociti maturi, può indicare infiltrazioni maligne. La citometria a flusso viene spesso citata come metodo per verificare l'origine clonale di tali aggregati [6]. Tuttavia, il risultato negativo della ricerca sulla citometria a flusso non esclude il fatto che gli aggregati linfoidi neoplastici possano essere ancora presenti nel midollo osseo. A causa dei motivi sopra esposti, il metodo più obiettivo di esame per confermare l'infiltrazione linfoproliferativa focale nel midollo osseo è una biopsia del trapano [8].

Negli ultimi anni, i criteri diagnostici per il mieloma multiplo sono cambiati significativamente e attualmente la percentuale di plasmacellule nel midollo osseo non è considerata decisiva per confermare la diagnosi. I conteggi delle cellule plasmatiche ≥30% e 10-29%, definiti come criteri di base per il mieloma multiplo "di base" e "minori" (secondo la precedente classificazione OMS), non sono più utilizzati. Si stima che la percentuale di plasmacellule confermata durante la prima diagnosi nella maggior parte dei pazienti sia ≥10%. Questa condizione non regge in circa il 10% dei pazienti con mieloma multiplo (MM) [9]. In questo studio, abbiamo dimostrato che le differenze nelle percentuali delle plasmacellule sono particolarmente elevate a seconda del metodo di preparazione dei vetrini utilizzati in connessione con la natura della crescita aggregata delle plasmacellule nel midollo osseo. Pertanto, gli studi di routine sulla patologia e l'uso della tecnologia 2 per gli studi microscopici sono pienamente giustificati. Attualmente, per confermare la diagnosi di MM, è necessario dimostrare che nel midollo osseo è presente un clone di plasmacellule, che necessita di altri metodi, come la citometria a flusso. Tuttavia, la citometria a flusso non può essere considerata un sostituto dell'esame microscopico [10]. Gli autori hanno dimostrato che, sebbene la valutazione citofluorimetrica confermi la presenza di cloni di plasmacellule nel midollo osseo, la percentuale di plasmacellule è molto inferiore rispetto agli studi morfologici, spesso non superiore al 5%. Pertanto, sembra giustificato non raccomandare la citometria a flusso per valutare l'entità dell'infiltrazione delle plasmacellule, che dovrebbe invece essere valutata utilizzando studi patologici o valutazioni microscopiche utilizzando i vetrini ottenuti utilizzando la tecnica 2.

Le cellule grasse che fanno parte dello stroma del midollo osseo sono localizzate principalmente alle particelle del midollo osseo. Pertanto, queste cellule sono raramente visibili a una certa distanza dalle particelle e se ci sono diversi mastociti distanti in una diapositiva preparata secondo il metodo 1, ciò può suggerire che il numero effettivo di mastociti nel midollo osseo sia effettivamente molto più alto. Tuttavia, tale aumento non fornisce alcuna informazione sul motivo di questo aumento del numero di mastociti, che potrebbe essere dovuto a un processo infiammatorio reattivo. Gli aggregati di mastociti localizzati nelle particelle del midollo osseo indicano fortemente il processo proliferativo [11]. Tali aggregati sono stati osservati sulla maggior parte dei vetrini ottenuti usando la tecnica 2, che è stata ottenuta da pazienti con una diagnosi confermata di SM. Nelle diapositive preparate usando la tecnica 1, era impossibile riconoscere tali aggregati in particelle di midollo osseo non digerito. Con solo pochi mastociti disponibili, non sembra possibile determinare con precisione la percentuale di forme atipiche, che è uno dei criteri per la diagnosi di CM [12]. Questo è il motivo per cui gli esami microscopici per SM devono essere eseguiti utilizzando vetrini preparati secondo il metodo 2. In vetrini preparati usando la tecnica 1, l'immagine del midollo osseo era generalmente poco chiara e ambigua e le caratteristiche dei cambiamenti di SM sono state osservate solo quando l'infiltrazione significativa era presente. Tuttavia, va sottolineato che la biopsia del trefalo rimane necessaria per ogni paziente sospettato di mastocitosi sistemica.

L'esame al microscopio del midollo osseo è assolutamente importante per la diagnosi di AL, MDS e CMML. La classificazione franco-americana-britannica precedentemente utilizzata ha qualificato questi tumori solo sulla base delle caratteristiche citologiche e citochimiche [13, 14]. I criteri diagnostici sono stati significativamente migliorati con l'aggiunta di immunofenotipizzazione, test citogenetici e molecolari. Molti dati preziosi forniscono una valutazione della biopsia del trapano, che dovrebbe essere sempre eseguita se si sospetta la sindrome mielodisplastica. Nonostante ciò, la valutazione microscopica è ancora cruciale per la percentuale di discriminazione delle cellule di dominio. Inoltre, non esiste un metodo migliore per stimare la quantità di un'esplosione nel midollo osseo. L'analisi della citometria a flusso, basata sul conteggio delle cellule CD34 +, non può sostituire l'esame al microscopio, poiché non tutte le cellule esplosive esprimono l'antigene CD34. Inoltre, l'analisi della citometria a flusso è fortemente dipendente dalla diluizione del midollo osseo da parte del sangue, nonché dalla fibrosi del midollo osseo [15]. Le limitazioni di cui sopra possono portare a percentuali falsamente basse di celle di dominio. La classificazione attualmente utilizzata di MDS si basa non solo sulla conferma della presenza di displasia aumentata, ma anche sul numero di cellule esplosive nel sangue e nel midollo osseo. Questo ultimo parametro ha un valore predittivo significativo ed è incluso nei tre parametri necessari per la creazione del Sistema di previsione internazionale, che, a sua volta, viene utilizzato per prendere decisioni terapeutiche [16]. È stato riscontrato che entrambe le tecniche di preparazione delle diapositive sono ugualmente sensibili alla rilevazione di anomalie displastiche. La tecnica 2 è utile in termini di valutazione delle linee piastriniche: il numero di megacariociti è di solito molto più alto, e i dettagli nella forma di nuclei sono più facili da vedere. Tuttavia, se le caratteristiche qualitative della displasia sono deboli e il numero di esplosioni è l'anomalia dominante, l'uso del metodo 1 può portare a risultati falsi-negativi e non consente di confermare la diagnosi di MDS. Le differenze nel numero di cellule del dominio in MDS, apparentemente, erano associate non solo alla diluizione del midollo osseo con sangue periferico, ma anche al fatto che le cellule di esplosione possono essere combinate in cluster nelle particelle del midollo osseo. Queste particelle sono chiaramente visibili negli studi sulla biopsia del trapano, di solito in forme più avanzate di MDS [15]. Pertanto, riteniamo che la tecnica 2 sia più affidabile per la diagnosi di MDS e si correli meglio con il quadro clinico dei pazienti.

Differenze clinicamente significative in entrambi i metodi di preparazione del midollo osseo sono spesso associate a leucemie acute associate a mielodisplasia multilivello oa leucemie secondarie. Molto spesso, la sindrome mielodisplastica, come indicato nei vetrini ottenuti con la tecnica 1, è riconosciuta come leucemia acuta in vetrini ottenuti secondo il metodo 2. Tenendo conto della possibilità di crescita focale delle cellule del dominio, per stabilire un sottotipo di iperplasia del midollo osseo (MDS o AML), è consigliabile utilizzare la più alta percentuale di blasti cellulari da vetrini ottenuti con la tecnica 1 o tecnica 2. Questo approccio soddisferà i criteri per riconoscere la crisi delle cellule di dominio in cronica leucemia mieloide [17].

Monitorare gli effetti della chemioterapia sulla leucemia acuta richiede probabilmente i metodi diagnostici più accurati, che si basano principalmente su metodi immunologici e / o molecolari. L'esame microscopico ha perso significato, poiché di solito non fornisce l'accuratezza richiesta da molti regimi terapeutici moderni. Nel nostro studio, abbiamo dimostrato che una valutazione del midollo osseo utilizzando la tecnica 1 ha mostrato la remissione, mentre uno studio condotto su vetrini preparati utilizzando il metodo 2 ha escluso la remissione. Gli studi di citometria a flusso dovrebbero indicare una quantità di esplosione simile alle indicazioni ottenute con la tecnica 1. Va ricordato che quando si prendono decisioni terapeutiche, la citometria a flusso di solito tende a rilevare un numero inferiore di cellule del dominio di quanto potrebbe effettivamente essere.

I risultati presentati confermano che l'esame microscopico del midollo osseo in pazienti con una delle numerose patologie neoplastiche ematopoietiche può produrre risultati diversi a seconda del metodo utilizzato per preparare i vetrini. Molti dei sintomi significativi facilmente osservabili nei vetrini preparati utilizzando la tecnica 2 (ad esempio, infiltrazione di linfociti focali o mastociti) possono non essere osservati nei vetrini ottenuti usando la tecnica 1. D'altra parte, in alcune situazioni specifiche (ad esempio, cellule linfatiche molli), il metodo 1 può preservare meglio la morfologia di una singola cellula. Pertanto, supportiamo pienamente le linee guida ICSH, che stabiliscono che l'esame microscopico deve essere effettuato utilizzando vetrini preparati utilizzando una qualsiasi di queste tecniche. Riteniamo che la tecnica 2 sia più vantaggiosa rispetto alla tecnica 1. Inoltre, i risultati ottenuti utilizzando i vetrini ottenuti con il metodo 2 sono correlati meglio con i risultati del quadro clinico e lo studio della biopsia del trefolo. Pertanto, raccomandiamo di utilizzare il Metodo 2 come metodo principale per stabilire una diagnosi o prendere decisioni terapeutiche basate sull'esame microscopico del midollo osseo.

Conflitto di interessi Gli autori non dichiarano un conflitto di interessi.

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Per cosa viene prelevata la puntura del midollo osseo e cosa mostra l'analisi?

La puntura del midollo osseo è un metodo diagnostico utilizzato per monitorare o identificare le malattie che colpiscono il sangue e il sistema ematopoietico. La puntura viene anche utilizzata per escludere o confermare anemia, leucemia e altre malattie ematologiche. Lo studio del midollo osseo viene assegnato sulla base dell'esame fisico e della storia del paziente. Nell'articolo esamineremo cosa è - la puntura del midollo osseo.

Cos'è la puntura del midollo osseo?

Prima di eseguire la procedura, la vescica e l'intestino devono essere svuotati e altri esami diagnostici o procedure chirurgiche non sono raccomandati il ​​giorno della puntura.

Il midollo osseo è costituito da cellule staminali, che sono grandi cellule indifferenziate. Esistono due tipi principali di cellule staminali, quindi il midollo osseo è costituito da due tipi di tessuto cellulare. Un tipo è coinvolto nella produzione di cellule del sangue e l'altro nella produzione di cellule stromali.

L'aspirazione del midollo osseo viene principalmente utilizzata per valutare la morfologia e ottenere un conteggio cellulare differenziale. Il materiale ottenuto durante l'aspirazione può essere studiato con metodi citogenetici, molecolari, microbiologici, immunoistochimici e citometrici.

Una biopsia e un successivo esame istologico consentono di valutare la cellularità complessiva del midollo osseo, identificare lesioni focali e determinare il grado di infiltrazione da parte di vari microrganismi patologici.

I pazienti sono interessati: da dove viene il midollo osseo? Durante la puntura, il midollo osseo viene rimosso con un ago speciale dall'osso pelvico o dallo sterno. Vari stadi di maturità delle cellule del sangue possono essere rilevati in laboratorio. Con l'aiuto di mielogramma è possibile identificare le malattie del sangue o del sistema ematopoietico.

I campioni di midollo osseo possono essere ottenuti mediante aspirazione o biopsia. Il campione ottenuto con il metodo di aspirazione è semi-fluido, quindi può essere esaminato da un patologo al microscopio ottico e analizzato mediante citometria a flusso, citogenetica, analisi cromosomiche e reazione a catena della polimerasi (PCR).

Trepanobiopsy è un tipo di biopsia puntura in cui viene prelevato il tessuto solido del midollo osseo. Il campione può essere utilizzato per analisi immunoistochimiche. Una trepanobiopsia midollare è più spesso utilizzata per chiarire la diagnosi principale.

testimonianza

La puntura del midollo osseo avviene se il medico ha il sospetto di malattia ematica e del sistema ematopoietico.

  • Diagnosi o monitoraggio di anemia, leucemia, aplasia del midollo osseo;
  • Diagnosi di metastasi del midollo osseo (diffusione di tumori da altri organi);
  • Ottenere cellule staminali per il trapianto.

La leucemia è la più comune malattia del midollo osseo. Il termine "leucemia" comprende varie malattie maligne, tutte simili nel senso che derivano dai precursori dei linfociti. Queste cellule alterate si sono gradualmente diffuse in tutto il midollo osseo rosso, influenzando in tal modo la normale formazione di sangue. Entrano anche nel flusso sanguigno, da dove invadono linfonodi, milza, fegato e altri organi interni. Inoltre, la mancanza di cellule del sangue funzionali provoca anemia nei pazienti.

Controindicazioni

Quando la forma scompensata del diabete mellito non è raccomandata la puntura del midollo osseo.

Esistono diverse controindicazioni all'esame del midollo osseo. L'unica ragione assoluta per la quale l'esame non può essere eseguito è la presenza di emorragie gravi, poiché il sanguinamento può verificarsi dopo la procedura.

Se si è sviluppata un'infezione grave nell'articolazione dell'anca, è necessario selezionare un altro sito per l'esame. L'aspirazione e la biopsia del midollo osseo possono essere eseguite senza rischi anche con trombocitopenia estrema (basso numero di piastrine).

Possibili complicazioni

Una puntura affilata può causare forti dolori. Questo breve e acuto dolore si arresta rapidamente; può anche essere ridotto da appropriati antidolorifici. Inoltre, in rari casi, una puntura di midollo osseo può causare le seguenti complicanze:

  • Sanguinamento e infezione nel sito di puntura;
  • Trauma e infiammazione di organi adiacenti e strutture tissutali;
  • Disturbi respiratori o cardiovascolari con l'introduzione di tranquillanti o analgesici.

Con la puntura, come con altri esami e procedure di trattamento, possono verificarsi complicazioni potenzialmente indesiderate. Molti pazienti possono essere preoccupati per il dolore intenso dovuto alla puntura. Tuttavia, le conseguenze di malattie inspiegabili possono essere più gravi del dolore derivante dalla procedura.

Altri effetti avversi includono:

  • Ematomi e ascessi;
  • Sepsi (avvelenamento del sangue);
  • Perforazioni e lesioni (organi adiacenti, nervi, vasi sanguigni).

Il midollo osseo può essere perforato su base ambulatoriale o ospedaliera (presso il Dipartimento di Medicina Interna, Ematologia, Oncologia). A seconda della situazione, è necessaria la consultazione o l'istruzione del medico curante.

Progresso della procedura

Paracetamolo o altri analgesici possono essere presi per alleviare il dolore per diversi giorni.

La puntura di aspirazione viene eseguita per prima. Un ago di aspirazione viene inserito attraverso la pelle a mano fino a raggiungere l'osso. Quindi l'ago viene fatto avanzare attraverso il periostio (strato esterno rigido dell'osso) nella cavità cerebrale. Non appena l'ago penetra nel midollo osseo aspirato, viene prelevato del liquido. Ciò richiede una certa precisione nei movimenti del medico durante la procedura al fine di evitare un elevato contenuto di sangue nel campione.

Se la puntura con aspirazione non è sufficiente, viene effettuata una biopsia nell'area del midollo osseo. Viene utilizzato un ago grande, che viene posizionato e fissato nella corteccia ossea. Quindi l'ago viene inserito in un movimento di torsione e girato per ottenere un pezzo solido di sostanza del midollo osseo. Il campione risultante viene rimosso dal paziente insieme all'ago. La durata della procedura può essere compresa tra 10 e 15 minuti.

Se si sospetta un cambiamento maligno nel midollo osseo, può essere eseguita anche una biopsia del punch. In laboratorio, il tessuto rimosso può essere tagliato, colorato ed esaminato al microscopio. Il più delle volte, la biopsia del punzone viene eseguita nei bambini.

Dopo aver completato la procedura, al paziente viene solitamente chiesto di sdraiarsi per 5-10 minuti. Dopodiché, se non c'è sanguinamento, il paziente può alzarsi e tornare alle proprie attività quotidiane. Il paracetamolo o altri analgesici semplici possono essere assunti dal paziente per alleviare il dolore per 2-3 giorni. Qualsiasi peggioramento di dolore, arrossamento, febbre, emorragia o gonfiore richiede un consiglio medico. Si consiglia ai pazienti di non lavare l'area forata per 24 ore per evitare l'infezione.

Preparazione per lo studio

Le medicine che interessano il flusso sanguigno dovrebbero essere fermate una settimana prima della procedura.

La puntura del midollo osseo è una procedura ambulatoriale breve. La frequenza cardiaca, la pressione sanguigna e altri valori saranno monitorati per un'ora dal medico. Se il paziente ha ricevuto un antidolorifico o tranquillante prima della procedura, è vietato guidare una macchina per un giorno. È sempre necessario consultare un medico per evitare possibili conseguenze della procedura. Il medico ti dirà quali farmaci o misure non sono raccomandati prima della procedura. A volte può essere molto doloroso durante la procedura. Normalmente, il dolore severo dovrebbe essere assente.

Prima della puntura, il medico chiede al paziente le malattie preesistenti e le droghe assunte il giorno prima. Se il paziente utilizza farmaci che fluidificano il sangue, è necessario informare il medico. L'aspirina e altri farmaci che influiscono sul flusso sanguigno devono essere sospesi una settimana prima della procedura.

risultati

Cosa mostra la puntura del midollo osseo? Lo studio del punchtate del midollo osseo viene utilizzato per identificare molte malattie, tra cui: leucemia, mieloma multiplo, linfoma, anemia e pancitopenia. Molte informazioni sul sangue possono essere ottenute attraverso la ricerca di routine - esami del sangue generali o biochimici. Tuttavia, al fine di conoscere l'origine delle malattie, a volte è necessario indagare sulla fonte delle cellule del sangue.

Durante l'aspirazione, non tutte le cellule del sangue sono sempre visibili; in alcune situazioni, ad esempio nel linfoma, le cellule agglutinano nelle trabecole dell'osso e non nelle sinusoidi, quindi non vengono raccolte o non sono visibili nell'analisi del midollo osseo.

Prezzo dove farlo

Il costo medio della puntura del midollo osseo a Mosca e nella regione di Mosca è di 500 rubli russi. Mielogramma - lo studio del punteggiato del midollo osseo - costa circa 2500 rubli. Il prezzo di molti studi dipende da una particolare clinica privata o ospedale comunale. Pertanto, si raccomanda di specificare il costo finale direttamente presso il centro medico.

Moderne possibilità di diagnosi del danno al midollo osseo nei linfomi non Hodgkin su materiale trepanobioptato

Autori: E.V. Chigrinova, A.I. Pavlovskaya GU RCRC loro. NN Blokhina RAMS, Mosca

Il coinvolgimento del midollo osseo (KM) nei linfomi nehodkine periferici (NHL) è una delle fasi regolari nel corso di questo gruppo di malattie. Le principali indicazioni per lo studio della CM in NHL possono essere formulate come segue:

  • stabilire la fase nella diagnosi iniziale di linfoma;
  • valutazione delle dinamiche del processo durante il trattamento;
  • valutazione della qualità della remissione ottenuta;
  • controllo della completezza della remissione;
  • valutazione della cellularità KM.

L'invasione del midollo osseo NHL può essere stabilita a vari livelli diagnostici, dalla microscopia ottica ai test molecolari biologici. Per tutti i tipi di studi, esistono criteri abbastanza chiari per l'identificazione della popolazione linfoide neoplastica e limiti oggettivi di possibilità. Come è noto, ci sono due tipi principali di materiale KM sotto esame: aspirato (sospensione cellulare nativa) e trepanobioptat (cilindro osteomidollare). Un aspirato di midollo osseo è una sospensione cellulare, che consente di fornire una caratteristica citologica qualitativa-quantitativa degli elementi dell'ematopoiesi, nonché di indagare l'immunofenotipo di ogni sottopopolazione cellulare normale e patologica mediante citofluorimetria a flusso (PC). Lo scopo della trepanobiopsia è uno studio morfologico complesso, che consente, oltre all'ematopoietico corretto, di ottenere informazioni sullo stato osseo e sui tessuti stromali. L'obiettivo di questa pubblicazione era un tentativo di un'esposizione accessibile dell'essenza dei metodi moderni di studio del CM a livello di trepanobioptat.

La Trepanobiopsia consente di valutare più pienamente la struttura della CM (presenza o assenza di infiltrazione linfoide in essa, la natura della sua distribuzione in CM e, in particolare, la posizione dell'infiltrato linfoide rispetto ai fasci laminati), nonché lo stato dell'ematopoiesi in generale, il rapporto tra tessuti grassi ed ematopoietici la cellularità di quest'ultimo, per caratterizzare lo stroma del CM e dei fasci ossei, in particolare, la distribuzione e la severità delle fibre di reticolina e di collagene, l'attività degli osteoblasti e degli osteoclasti, la larghezza delle intergrowths cavità, ecc. In assenza o inaccessibilità tecnica di una lesione extramidollare di una lesione da linfoma, in assenza di una linfocitosi patologica nell'aspirato KM, un KM trepanobioptum può diventare l'unica fonte di materiale diagnostico. Le ragioni che portano all'assenza di cellule linfomatose nell'aspirato includono il numero estremamente piccolo di cellule del clone leucemico, la gravità delle variazioni sclerotiche nei foci del linfoma e anche l'espressione delle cellule linfoma delle molecole di adesione (MA), che, da un lato, forniscono la disseminazione di emopoietiche il tessuto e lo stroma KM e, dall'altro, determinano la forza dei contatti intercellulari e stromali cellulari [1]. Le adesioni che forniscono tali interazioni intratissolari appartengono a tre superfamiglie: immunoglobuline - ICAM-1, CD54, integrine -? L (CD11a / LFA-1a),? X (CD11c),? 4 (CD49d / VLA-4),? 1 (CD29), 2 (CD18), 3; così come selectins - L-selectin (CD62L), P-selectin (CD62P). Naturalmente, questa non è l'intera lista di MA che può determinare il tipo di diffusione del NHL con il tropismo specifico per organo. Tuttavia, nella letteratura degli ultimi anni, l'espressione di questi tipi di MA è associata al coinvolgimento di CM e alle caratteristiche dell'architettura dei foci del linfoma in esso [2]. P.J. Lucio et al. [3] ha descritto la relazione tra l'espressione di CD11a, CD11c, CD18, CD29, CD44, CD49d, CD54, CD62L con la variante nosologica di NHL e l'aggressività del corso. Una delle scoperte interessanti del loro lavoro è stata l'assunzione che sia possibile classificare il NHL in generale, così come i singoli sottotipi all'interno di ogni nosologia, in accordo con il profilo immunologico dell'espressione MA. E. Horst et al. [4] forniscono una valutazione comparativa del livello di espressione della molecola CD44 durante la normale differenziazione di B e T e diversi stadi di NHL. Secondo i loro dati, l'espressione di CD44 corrisponde ai linfomi ad alto rischio di leucemia e il grado di espressione di questa molecola aumenta con la progressione del NHL. M.K. Angelopoulou et al. [5] caratterizzano anche il profilo immunologico dell'espressione MA in diversi NHL, evidenziando CD44 e CD56 come i principali fattori di rischio per il danno CM in NHL.

Quindi, ci sono fattori che, da un lato, contribuiscono alla leucemia di NHL, e dall'altro, possono essere un ostacolo per le cellule di linfoma di entrare nel materiale di aspirazione KM. In queste circostanze, il trepanobioptat CM può essere l'unico soggetto CM per lo studio del substrato leucemico.

È stato stabilito che con maggiore frequenza il midollo osseo è affetto da linfomi a cellule B a basso grado [6], che, secondo la classificazione OMS dei tessuti ematopoietici e linfoidi [7], includono linfomi di tipo a piccole cellule mature:

  • piccolo linfoma linfocitario / leucemia linfatica cronica a cellule B;
  • linfoma a cellule del mantello;
  • linfoma nodale della zona marginale;
  • tipo extramodale MALT e zona marginale della milza;
  • linfoma follicolare;
  • linfoma linfoplasma.

Analisi morfologica

L'efficacia della ricerca sui trepanobioptati dipende in gran parte dall'adeguatezza della biopsia. Quest'ultimo, secondo alcuni ricercatori, dovrebbe essere lungo da 2 a 3 cm (almeno non meno di 1,5 cm) e contenere almeno 5 o 6 cavità intergulacee [8, 9]. Ciò è dovuto al fatto che la cellularità di CM può essere diversa in diverse cavità intergulacee. Non può essere valutato attendibilmente per un piccolo frammento di CM, specialmente nei casi in cui il materiale è rappresentato da una zona subcorticale, vale a dire area situata sotto l'osso corticale. Questa zona è solitamente di piccole dimensioni, soprattutto negli anziani. Inoltre, più sono le cavità intergululose presenti nella biopsia, maggiore è la probabilità di rilevare lesioni focali del CM. Il successo della ricerca sulla trepanobioptata, senza dubbio, dipende anche dall'adeguatezza di tutte le fasi della sua elaborazione: fissazione, decalcificazione, versamento e produzione di sezioni istologiche. Negli ultimi anni sono stati fatti tentativi per migliorare metodicamente ciascuno degli stadi di elaborazione del CM, che è dettato principalmente dall'introduzione diffusa di metodi immunoistochimici nel processo diagnostico, in particolare per determinare la natura e la natura dell'infiltrazione linfoide nella CM. Ad esempio, sono stati proposti metodi per versare il materiale da biopsia in resine metacriliche senza previa decalcificazione [10, 11]. Tuttavia, allo stesso tempo viene sottolineato che questi metodi sono troppo costosi e richiedono tempo, e buoni risultati, inclusa la ricerca immunoistochimica, possono essere raggiunti con la stretta osservanza di tutte le regole e le esigenze del metodo istologico standard [11].

Le principali indicazioni per la trepanobiopsia KM sono:

  • linfoma sospetto;
  • istituzione di istotipo linfoma;
  • determinazione dello stadio del danno tumorale in tutte le fasi del processo terapeutico e diagnostico;
  • monitorare i risultati del trattamento al fine di rilevare la remissione, la remissione parziale, la recidiva del tumore, ecc.


La rilevazione dell'infiltrazione linfoide nel CM non è identica alla sua lesione linfoma. KM contiene normalmente cellule linfoidi, che possono rappresentare fino al 15-20% dell'intera popolazione di cellule nucleate di KM. Queste sono cellule mature e cellule progenitrici di linee linfoidi T e B. Tra le cellule mature, i linfociti T sono più numerosi e le cellule B-lineari dominano tra le cellule progenitrici. Le cellule linfoidi possono essere localizzate interstizialmente, tra gli elementi dell'emopoiesi e possono essere sotto forma di piccoli gruppi - noduli linfoidi. L'aumento del numero di cellule linfoidi può essere sia assoluto che relativo a causa della riduzione dell'ematopoiesi, ad esempio in condizioni ipoplasiche. Noduli linfoidi benigni possono essere trovati in qualsiasi KM, anche se si trovano più spesso negli anziani, nelle donne, in alcune malattie ematologiche e non-ematologiche, per esempio, nelle malattie reumatoidi [8], nei casi di infezione da citomegalovirus, nella toxoplasmosi, nella mononucleosi infettiva e in altri infezioni, con sindrome post-trasfusionale [12-14], ecc.

Quattro tipi di noduli linfoidi benigni sono descritti [15, 16]: il primo - con il centro germinale; il secondo - con confini chiari; il terzo - con contorni irregolari irregolari; il quarto - nella forma di piccoli gruppi di celle linfoidi. Oltre alle cellule linfoidi, di solito contengono plasmacellule, istiociti, capillari, a volte eosinofili e mastociti, oltre a una rete tenera di reticolina. Possono essere multipli, sono situati, di regola, intertrabecular. Il rilevamento dell'infiltrazione anche minima del linfoma è noto per essere un indicatore della generalizzazione del tumore e, pertanto, può essere importante per la prognosi e la pianificazione della terapia [17]. Pertanto, i problemi di chiarire la natura dell'infiltrazione linfoide, la diagnosi differenziale tra infiltrazione linfoide di carattere benigno e lesione del linfoma di CM sono estremamente importanti, ma allo stesso tempo uno dei più difficili, e non sempre risolti dalla ricerca istologica, ma richiedono l'uso di immunoistochimica, biologia molecolare, genetica metodi.

I principali criteri istologici utilizzati per la diagnosi differenziale di danno da linfoma CM e infiltrazione linfoide benigna, nonché per sottoclassi di linfoma in CM, sono, in primo luogo, le caratteristiche topografiche dell'infiltrazione linfoide e, in secondo luogo, le caratteristiche morfologiche (citoplasma nucleare) delle cellule infiltrate.

Esistono 3 tipi principali di localizzazione dell'infiltrazione linfoide tumorale nel midollo osseo: interstiziale, focale e diffusa [8] (Fig. 1).


Fig. 1. Rappresentazione schematica dei tipi di sconfitta KM in NHL [8]

Nel tipo interstiziale, le cellule linfoidi si trovano tra le cellule CM senza interrompere la normale architettura e l'emopoiesi (Figura 2).


Figura 2. Tipo interstiziale di lesione in B-CLL. Colorato con ematossilina e eosina, HC. 250

Con il tipo diffuso, si nota una massiccia infiltrazione linfoide che riempie tutto o quasi tutto lo spazio interglobale con una netta riduzione o completa sostituzione di tessuti adiposi ed ematopoietici. Il tipo di infiltrazione linfatica è caratterizzato dalla presenza di focolai, il più delle volte multipli. I focolai possono essere situati intertrabecolare e / o paratrabecolare. La localizzazione paratrabecolare può assumere la forma di uno strato di cellule linfoidi di diverse larghezze e lunghezze, strettamente adiacenti alle trabecole, con segni di sclerosi stromale o di una lesione situata sulla trabecola ossea con la sua ampia base (Fig. 3).


Fig. 3 Crescita paratormulare dell'infiltrazione tumorale nel linfoma follicolare. Colorato con ematossilina e eosina, HC. 200

I focolai di infiltrazione linfoide del tumore possono essere localizzati nelle parti centrali della cavità interstiziale, vale a dire intertrabecolari. Possono essere sotto forma di nodulo (Fig. 4) con un centro (più spesso senza di esso) di riproduzione o una lesione con contorni irregolari e scarsamente contornati.


Fig. 4. Lesione focale di CM nel linfoma della zona marginale. Colorato con ematossilina e eosina, HC. 200.

Una grande lesione può essere adiacente per una breve distanza alle trabecole, ma questo tipo di localizzazione del focus del linfoma non è paratracolare. Una variante del tipo di infiltrazione interstiziale è la localizzazione intrasinusoidale delle cellule tumorali (Fig. 5) [8, 18].


Fig. 5. Localizzazione intrasinusoidale dei linfociti tumorali. Immunoistochimica, colorante su CD20

Descrive un altro tipo di linfoma infiltrazione CM - dispersione singola cella con la presenza di linfoma singola cella tra le cellule ematopoietiche come minimamente espresse tipa.Imeyut combinazioni spaziali interstiziali di vari tipi di localizzazione infiltrazione linfoide costituiscono il tipo misto. Ad esempio, interstiziale-diffuso, interstiziale-nodulare, interstiziale-intrasinusoidale [8, 11]. Tenendo conto della topografia dell'infiltrazione del linfoma, delle caratteristiche morfologiche (citoplasma nucleare) delle cellule tumorali e della presenza o dell'assenza di segni di mielofibrosi nelle aree interessate, è stato sviluppato un algoritmo per linfomi sottoclassificanti in CM. La presenza di sola infiltrazione linfoma paratrabecolare consente, senza alcun dubbio, di parlare di linfoma follicolare. Il linfoma follicolare è anche caratterizzato da un tipo misto di infiltrazione, compresi i focolai inter-batterici, ma con l'indispensabile presenza di localizzazione paratrabecolare. La crescita interstiziale delle cellule di linfoma è molto rara e il tipo diffuso non è quasi mai stato trovato. Gli infiltrati sono costituiti prevalentemente da cellule simili a centrociti di varie dimensioni, con singole cellule del tipo centroblasto. La composizione cellulare predominante nella CM è il linfoma follicolare di tipo 1. Spesso, l'immagine del linfoma follicolare nel linfonodo non coincide con la composizione cellulare con l'immagine osservata in CM. Questo fenomeno è chiamato discordanza. Una caratteristica del linfoma follicolare nella CM è la mielofibrosi, che si osserva in aree di danno linfoma senza segni di rottura della normale architettura della CM.

Piccoli focolai di infiltrazione paratrabecolare possono verificarsi nel linfoma della zona del mantello e nel linfoma linfoplasmatico, ma possono escludere il linfoma da piccoli linfociti / leucemia linfatica cronica B. Per il linfoma della zona del mantello, sono tipici i tipi interstiziali e focali di crescita interstiziale delle cellule di linfoma [19]. Questi ultimi sono una miscela di cellule omogenee di piccole e medie dimensioni con profili irregolari della membrana nucleare. A volte le cellule hanno una morfologia centrocitideo, che può aumentare la somiglianza con il linfoma follicolare. Tuttavia, le grandi cellule con la struttura di centroblasti o immunoblasti non sono state trovate. È possibile la presenza di istiociti con citoplasma luminoso senza segni di fagocitosi. La mielofibrosi non è caratteristica. Per linfoma linfoplasmatico, sono tipici i tipi di crescita interstiziale, focale interstiziale e di crescita diffusa delle cellule tumorali. La localizzazione paratrabecolare si verifica, ma estremamente raramente [18]. La diagnosi di linfoma linfoplasmocitico in base alla localizzazione del linfoma infiltrato da solo è impossibile. Il ruolo decisivo è giocato da una dettagliata caratterizzazione della composizione cellulare, che è rappresentata da cellule come i piccoli linfociti, le cellule plasmatiche e linfoplasmacitoidi, così come un piccolo numero di immunoblasti, plasmablasti. Frequente è la mielofibrosi, focale o diffusa, senza interrompere la normale architettura [14].

Con infiltrazione interstiziale e / o diffusa con o senza formazione di focolai, prima di tutto, vi è il sospetto di linfoma da parte dei piccoli linfociti / leucemia linfatica cronica a cellule B. La presenza di pseudofollicoli in casi di crescita prevalentemente tumorale, caratteristiche della composizione cellulare dell'infiltrato (piccoli linfociti con nucleo arrotondato, cromatina grumosa) ci permettono di confermare il presunto istotipo del linfoma. La mielofibrosi per linfoma da piccoli linfociti / leucemia linfatica cronica B non è tipica.

Il linfoma della zona marginale della milza, con o senza linfociti vascolari circolanti, è caratterizzato da infiltrazione focale inter-batterica o diffusa delle cellule tumorali della CM. La localizzazione delle cellule di linfoma all'interno dei seni del midollo osseo è considerata caratteristica [20-22]. Questo tipo di infiltrazione può verificarsi in altre forme di realizzazione linfoma [18], ma in caso di diffusione diagnosticato splenici linfomi della zona marginale può essere posizionato con elevata probabilità. Il linfoma della zona marginale del tipo di MALT nodale ed extranodale coinvolge raramente il CM, ma nei casi della sua sconfitta si verifica un tipo di infiltrazione focale interstiziale. Foci di grandi dimensioni possono riguardare le trabecole ossee, alcune delle lesioni possono assomigliare a follicoli linfoidi, hanno centri di riproduzione e un'ampia zona marginale costituita da cellule con morfologia monocitoide. Nella composizione cellulare ci sono cellule linfoidi di piccole e medie dimensioni con nuclei arrotondati, larghezza moderata del citoplasma luminoso, così come un diverso numero di plasmacellule, un piccolo numero di cellule linfoidi attivate. Le varianti aggressive dei linfomi periferici non-Hodgkin delle cellule B - linfoma diffuso a grandi cellule e linfoma di Burkitt - sono principalmente caratterizzati dal tipo diffuso di crescita delle cellule tumorali nella CM.

La sconfitta di CM nei linfomi periferici delle cellule T è meno comune rispetto a quella delle cellule B periferiche [23]. Gli istotipi dei linfomi periferici delle cellule T sono:

  • non specificato;
  • angioimmunoblastica;
  • linfoma anaplastico a grandi cellule e linfociti T cutanei.

La frequenza delle lesioni KM nei linfomi periferici delle cellule T è molto variabile, così come i tipi di localizzazione del substrato linfoma. Le caratteristiche dei linfomi periferici delle cellule T includono la loro capacità di causare marcati cambiamenti secondari sotto forma di proliferazione vascolare, reazione granulomatosa, eosinofilia, mielofibrosi, ecc. Uno dei problemi importanti nella verifica delle lesioni KM nei linfomi periferici delle cellule T è la diagnosi differenziale con proliferati di cellule T reattive, che si trovano in malattie tumorali, come tumori a cellule B a piccole cellule, linfoma di Hodgkin classico, predominanza linfoide nodulare di linfoma di Hodgkin, mielo-displasia., linfoma diffuso a grandi cellule B, ricco di linfociti T e / o istiociti, nonché in stati non tumorali: malattie autoimmuni come l'artrite reumatoide e la polimialgia, un numero di infezioni virali e batteriche, ecc. [23].

L'interpretazione delle informazioni istologiche non è sempre semplice, e nella maggior parte dei casi è impossibile una diagnosi corretta basata sull'esame istologico. È necessaria una stretta collaborazione tra l'istopatologo e l'ematologo, un ampio uso di ulteriori metodi di ricerca, come l'immunofenotipizzazione e, in alcuni casi, l'analisi molecolare biologica e genetica.

immunofenotipizzazione

Trepanobioptum CM (cilindro osteomidollare) è una densità materiale eterogenea: il componente osseo è una sostanza densa, il tessuto ematopoietico è una sostanza semiliquida sciolta. Per effettuare reazioni immunologiche, è necessario preparare sezioni ultrasottili che richiedano di portare tutti i componenti istologici ad una densità uniforme. Ciò può essere ottenuto ammorbidendo le strutture ossee o comprimendo il tessuto ematopoietico stesso. Nel primo caso viene eseguita la decalcificazione ossea, il secondo effetto può essere ottenuto versando il materiale in soluzioni a base di resine metacriliche o congelamento a basse temperature (fino a -700 ° C) in miscele speciali, ed entrambi i metodi non richiedono un processo di decalcificazione [24, 25]. Il congelamento del materiale trepanobiopatico è ideale per preservare i determinanti antigenici, mentre l'uso di resine metacriliche consente di ottenere preparazioni istologiche di eccellente qualità [10, 11]. Attualmente, come già notato, il metodo di decalcificazione è il più usato nella pratica di routine, seguito dal versamento del materiale in paraffina. La scelta del metodo è avvenuta in seguito alla selezione storica, tenendo conto della fattibilità economica e dell'accessibilità tecnica.

Indipendentemente dal protocollo istologico utilizzato per riempire il materiale, la colorazione immunologica del materiale viene effettuata secondo un unico principio, che si basa sulla reazione dell'antigene di interesse - un anticorpo monoclonale. Il tipo di preparazione istologica di un trepanobiopta può solo influenzare il tipo di colorante con il quale una reazione positiva può essere letta da un morfologo. Pertanto, per i tagli a criostato, l'uso di coloranti fluorescenti è ottimale, per un materiale incorporato in paraffina o resine metacriliche, i cromogeni sono visibili a livello di microscopia ottica. L'evoluzione dei metodi immunologici per lo studio del materiale dei trepanobioptati di CM ha portato alla scelta di un metodo immunoenzimatico (immunoistochimica - IHC) su sezioni di paraffina di CM come il principale. Per chiarezza, puoi fare un confronto tra tutti i metodi di colorazione (vedi tabella).

Tabella. Confronto tra diversi metodi di colorazione a seconda del protocollo per il trattamento del materiale trepanobioptat

Nel laboratorio di immunologia di emopoiesi del Centro scientifico del cancro russo, sono stati testati tutti i metodi presentati. La preferenza è data all'IHH in combinazione con l'immunofluorescenza sulle sezioni di paraffina [26, 27]. È ovvio che l'immunofenotipizzazione dei trepanobioptati di CM è un processo tecnicamente difficile ed economicamente costoso e richiede pertanto indicazioni chiaramente formulate per la conduzione.

In generale, in NHL, i principali compiti di immunofenotipizzazione di CM sono:

  • rilevazione di infiltrazione linfoide neoplastica;
  • diagnosi differenziale di vari linfomi;
  • diagnosi differenziale con processi reattivi.

La priorità nella soluzione dei compiti dovrebbe essere, ovviamente, data alla citofluorimetria a flusso moderno dell'aspirato KM. Le indicazioni per gli studi immunoistochimici dei trepanobioptati KM nella NHL sono ancora più strette. Lo studio dovrebbe essere condotto:

  • quando viene rilevata infiltrazione linfoide patologica di CM e non vi è alcuna possibilità di citofluorimetria a flusso aspirato;
  • nel caso di una significativa mancanza di cellule nell'aspirato o di una bassa percentuale del numero totale di linfociti nei linfomi caratterizzati da un'alta frequenza di lesioni KM;
  • come parte di uno studio completo di CM con varianti CD5-negative (follicolare, tutte le varianti del linfoma della zona marginale);
  • per la diagnosi differenziale di plasmocitosi reattiva e tumorale, con una bassa percentuale di plasmacellule nell'aspirato;
  • in tutti i casi, se solo un materiale è rilevato in un trepanobioptato KM di infiltrazione linfoide sospetta per tumore.

Nel NHL delle cellule T, dovrebbe essere data preferenza anche al controllo di qualità, poiché la co-espressione degli antigeni è considerata diagnostica per la maggior parte dei linfomi. Inoltre, ci sono difficoltà nell'uso di anticorpi contro i recettori delle cellule T e -, e che determinano la clonalità dei linfociti T neoplastici su sezioni di paraffina di CM. Uno studio immunomorfologico integrato di un trepanobioptato di tutti gli NHL T-lineari richiede linfoma anaplastico a grandi cellule (ACL), poiché si distingue per un particolare tipo di invasione del midollo osseo - sotto forma di monodispersione di singole cellule tra elementi di emopoiesi, che può essere determinato solo immunoistochimicamente. Secondo i dati del mondo, la percentuale di leucemia di questa variante è di circa 30, mentre lo studio di KM aspirato, di regola, non è informativo [28-30]. Ad esempio, nel lavoro di A.I. Slugina [31], dove il linfoma a grandi cellule nei bambini in nessuno dei 18 bambini con diagnosi di ACL stabilito sulla base delle lesioni morfoimmunofenotipirovaniya nodali ed extranodali, nei detriti studio aspirato da due punti di lesione KM non determinato.

M. Fraga et al. [32] per l'esame istologico di routine di materiale bioptico perdita KM scoperto solo nel 17% dei pazienti, e per condurre ulteriori colorazione immunoistochimica con anticorpi monoclonali CD30 e antigene di membrana epiteliale (EMA) - è del 23% dei pazienti. In tutti i 42 casi inclusi nel loro lavoro, c'era una dispersione di singoli elementi tumorali tra le normali cellule ematopoietiche e gli adipociti. Simili caratteristiche istologiche dell'invasione del midollo osseo di AKL sono anche descritte nelle opere di Y. Sadahira et al. [16] e C. Bayle et al. [33].

Per quanto riguarda il B-NHL, il valore diagnostico obiettivo dell'immunofenotipizzazione dei campioni bioptici di trephine di CM non è lo stesso per diverse varianti, pertanto, le principali capacità diagnostiche del metodo possono essere presentate in modo più chiaro in accordo con le nosologie. Ad esempio, la leucemia linfocitica a cellule B / linfoma dei linfociti piccoli (B-CLL / LML) e la leucemia linfatica cronica, oltre alle caratteristiche immunofenotipiche pronunciate hanno un alto potenziale di leucemia (> 90%), che si riflette nell'aspetto stabile della linfocitosi patologica nell'aspirato CM [7, 8, 14]. Uno studio immunomorfologico completo dell'aspirato mediante PC può essere considerato fondamentale, dal momento che solo il PC consente l'uso di etichette fluorescenti doppie e triple per valutare la coespressione di marcatori diagnostici: CD23 e CD5 con B-CLL / LML e CD103 e CD25 con ON sulla superficie dei linfociti CD19 + [34, 35].

La necessità di una trepanobiopsia con un quadro leucemico completo di sangue periferico e CM aspirato non è completamente chiara. Se alcuni autori, nella letteratura degli anni precedenti, rivendicano il valore prognostico di diversi tipi di infiltrazione CM in B-CLL [36, 37], altri, più tardi, lo confutano [38, 39]. Successivamente abbiamo destinato indicazioni più affidabili di aggressività biologica del tumore, come ad esempio la presenza di mutazione somatica nei geni codificanti le regioni variabili delle catene pesanti, l'espressione delle molecole CD38 e alti livelli di 2 - microglobulina [40, 41].

Linfoma a cellule del mantello (LKM)

La sconfitta di CM con LKM si verifica in circa il 75-80% dei pazienti [42-48], e in contrasto con B-CLL, la fase leucemica del sangue periferico si trova solo nel 50% dei pazienti. P.L. Cohen et al. [49] hanno descritto la più alta percentuale (93) di danno CM nel linfoma della zona del mantello sul materiale di 46 pazienti. Gli autori hanno spiegato questo risultato esaminando il materiale della trepanobiopsia strettamente bilaterale in tutti i pazienti. Il metodo primario per determinare l'immunofenotipo di un clone leucemico in questa nosologia dovrebbe essere considerato come PC aspirato, che consente di determinare l'antigene CD5 sui linfociti B clonali e il livello di espressione della molecola CD20. Tuttavia, sono stati accumulati sufficienti casi per questo linfoma con un profilo di espressione aberrante di marcatori immunologici: senza espressione di CD5 con espressione positiva di CD23 [50], co-espressione di CD5 e CD23 [51], CD5 e CD10 [42, 44], CD10 in assenza di CD5 [52] Inoltre, il principale segno patognomonico del linfoma, secondo la classificazione dell'OMS (2001), è l'iperespressione della ciclina D1, associata alla traslocazione (11; 14), che colpisce i loci dei geni che codificano le pesanti catene di immunoglobuline sul cromosoma 14 e il bcl-locus 1 (cyclin D1) su x omosome 11 [53-57]. Si ritiene che l'evento genetica svolge un ruolo importante nella patogenesi del linfoma a cellule del mantello, come la sovraespressione della ciclina D1 (proteina - regolatore del ciclo cellulare) blocchi di celle in fase di interfaccia G1? S. Cyclin D1 si riferisce alle proteine ​​espresse sulla membrana nucleare, quindi l'unico modo per determinarlo oggi è il metodo immunoistochimico [58] (Fig. 6).


Fig. 6. Espressione nucleare della ciclina D1 da cellule di linfoma del substrato del midollo osseo dalle cellule del mantello. Immunoistochimica, SW. 250

Quindi, si può dire che la determinazione primaria dell'immunofenotipo del clone leucemico con LMC è più conveniente con l'uso del PC, ma l'identificazione finale della diagnosi richiede uno studio immunoistochimico del trepanobioptato CM.

Linfoma follicolare (FL)

Secondo dati statistici, il coinvolgimento di QM in PL è determinato nel 40-60% dei casi [59, 60] e la circolazione delle cellule tumorali nel sangue periferico è determinata in meno di un terzo dei pazienti [8].

La gravità dei cambiamenti sclerotici in QM, caratteristica di PL e probabilmente anche il profilo di espressione delle molecole di adesione, spesso impedisce alle cellule neoplastiche di entrare nell'aspirato [61-63], pertanto l'istologia della biopsia può essere considerata il metodo principale della ricerca KM con l'immunofenotipo noto di un tumore extramidollare. L'esistenza del "golden standard diagnostico" in FL - paratrabekulyarnoy linfoma substrato-tsentrotsitarno localizzazione struttura centroblastico - consente al patologo di limitare il livello dei km di ricerca standard, senza l'utilizzo di colorazione immunoistochimica.

È necessario uno studio immunoistochimico in PL per determinare l'infiltrazione minima residua di CM nel valutare la completezza della remissione [64]. Tuttavia, quando la quantità minima di valutazione cellule B della loro natura è già oltre le capacità e IHC può essere effettuata solo in base determinazione riarrangiamenti clonali di geni immunoglobulinici o traslocazione t pathognomonic (14; 18).

Linfoma marginale (LMZ)

Nella classificazione WHO (2001), si distinguono 3 tipi principali di linfomi provenienti da cellule della zona marginale del mantello di follicoli linfoidi o accoppiamenti linfoidi periarteriolari. Questi sono LMZ della milza, versione nodale di LMZ, così come la variante associata alle mucose (MALT).

In LMZ della milza, secondo varie fonti, il danno da CM è più comune nel 67-100% dei casi [65-68], con i linfomi MALT in circa il 20% [65, 69, 70]. Il coinvolgimento di CM con la versione nodale è considerato casistica, che, tuttavia, può essere spiegato dalla rarità della stessa nosologia [12, 71, 72]. Nella fase di immunofenotipizzazione, la diagnosi di LMZ è stabilita più probabilmente dal metodo di eliminazione, dal momento che le tipiche associazioni di marker immunologici non sono definite. L'espressione di antigeni pan-B-lineari è caratteristica in assenza di co-espressione di molecole CD5, CD23, CD10 [1, 73-77]. Per la diagnosi differenziale all'interno del gruppo LMZ, può essere utile prendere in considerazione alcune differenze nell'espressione delle immunoglobuline di superficie. Quindi, per LMZ della milza, la coespressione di IgM +, molecole di IgD + è caratteristica, mentre per la variante nodale sono presenti solo molecole di IgM in assenza di IgD [7, 78]. In questo articolo, vorrei concentrarmi sulla variante LMZ della milza, che ha il più grande trofismo per il tessuto ematopoietico. Va notato che un numero di pazienti con LMZ della milza ha difficoltà oggettive nella splenectomia, pertanto il carico diagnostico ricade spesso sul substrato leucemico disponibile del linfoma.

Patologica linfocitosi aspirato CM a LMZ permette di studiare le cellule del linfoma della milza fenotipo mediante citometria e citogeneticamente [8, 79]. Poiché questo linfoma non ha sufficientemente immunologica tipica e caratteristiche citogenetiche (delezione del cromosoma 7 avviene in meno del 40% dei casi, trisomia del cromosoma 3 - meno del 17%) per confermare la diagnosi è utile qualsiasi ulteriori informazioni diagnostiche, ad esempio, l'identificazione di un particolare tipo di crescita linfomi in trepanobioptato CM (WHO). Per LMZ milza descritto due pathognomonic tipo istologico crescita - nodulare intrasinusoidalny e [8, 14]. Nel primo tipo di definizione tumore "sludge" all'interno del letto vascolare nella norma sondaggio microcircolare sezioni trepanobiopatov CM non sempre è possibile macchiato - solo utilizzando colorazione immunoistochimica con anticorpi monoclonali marcatori di cellule pan-B (Figura 7) [27]..


Fig. 7. Localizzazione intrasinusoidale di cellule tumorali "addolcire" in LMZ della milza. Immunoistochimica, colore CD20, SW. 200

cellule malate colorate marrone cromogeno (DAB), strutture lineari si formano nel corso di "martellato" dei seni (microvasi) nodulare tipo KM è la seconda frequenza di occorrenza a LMZ milza. Si distingue posizione intertrabecolari, mantenendo centri germinali residue (segno variabile) e zonizzazione espresso [8, 14, 80]. Detta associazione caratteristiche morfologiche definisce noduli patologiche similarità con follicoli linfoidi reattivi, quindi ovviamente condurre studi immunoistochimici trepanobioptate CM al tipo nodale infiltrazione linfoma a LMZ milza anche richiesto, e nello studio, oltre alla diagnosi differenziale con altre forme di realizzazione di piccole cellule periferiche B-cell linfoma, include l'esclusione della natura reattiva dell'infiltrazione linfoide. Una caratteristica aggiuntiva della neoplastica natura linfoma infiltrati considerata formazione di una rete di cellule dendritiche follicolari positive per CD21, CD23 e CD35, che non è tipico per infiltrati in altre forme di realizzazione, B-NHL e noduli getto (Fig. 8) [14, 80, 81].


Fig. 8. Rete di cellule dendritiche follicolari in noduli di linfoma con LISS. Immunoistochimica, colore su CD21

La leucemizzazione del MALT, come già riportato, è piuttosto rara [65, 69, 70]. Tuttavia, in questi linfomi si possono rilevare infiltrati linfoidi reattivi a cellule T sufficientemente densi. Determinare la natura di questi infiltrati con l'eccezione di una specifica lesione KM sottostante alla stadiazione corretta con MALT è anche possibile solo con immunofenotipizzazione [82].

Plasma B-NHL

Immunoistochimica trepanobioptate CM appare notevole test diagnostico differenziale in una bassa percentuale di cellule plasmatiche aspirati da pazienti con IM paraproteinemia sospettato di fase mieloma multiplo (MM) o il monitoraggio della malattia residua minima MM nei pazienti trattati. Ottimale in combinazione può essere considerato informativi immunoassorbimento e immunofluorescenza metodi su un trepanobioptate materiale CM (Fig. 9) [27, 83]. L'immunoistochimica consente di determinare il numero, la posizione e le caratteristiche citologiche delle plasmacellule. Uso di anticorpi marcati con fluorescenza doppia per catene leggere di immunoglobuline? e? consente di determinare le cellule plasmatiche mono o policlonali in un unico campo visivo.


Fig. 9. Plasmacitosi reattiva. e - colorazione immunoistochimica su CD138 (syndecan-1); b - colorazione immunofluorescente con un anticorpo marcato combinato? (luce verde) /? (luce gialla)

Nella fig. 9, e si vede chiaramente che le plasmacellule colorate con il cromogeno marrone hanno un aspetto maturo, mancano di atipie nucleari e si trovano pericapillari (lungo il seno). Tutti i segni sono più caratteristici della plasmocitosi reattiva. Nella fig. 9b - nel campo oscuro di un microscopio a fluorescenza, il rapporto delle plasmacellule che trasportano le catene β - e - di immunoglobuline è approssimativamente lo stesso (esiste una leggera predominanza di? +), I.e. le cellule non sono clonali. La diagnosi di mieloma multiplo è esclusa.

Aggressivo B-NHL: linfoma diffuso a cellule B a grandi cellule (DL) e linfoma di Burkitt (LB)

La definizione di danno CM in queste varianti con una morfologia caratteristica sembra essere piuttosto semplice e nei casi dell'immunofenotipo noto della componente extramidollare, può essere limitata solo dallo studio morfologico del materiale bioptico da trephine o CM aspirato. Di particolare interesse è lo studio di infiltrati linfatici a piccole cellule discordanti in CM con un numero di B-NHL, in particolare, con DL e LB. Nella letteratura moderna, il fenomeno delle situazioni istologiche discordanti con DLBL è discusso piuttosto raramente. Riassumendo tutto il materiale letterario disponibile, si possono identificare tre principali ragioni di discordanza [17, 84]:

  • trasformazione in una variante più aggressiva (NHL a celle grandi). Più caratteristico di FL e B-CLL (sindrome di Richter) ed è una manifestazione morfologica di una progressione del tumore;
  • processo reattivo. Le infiltrazioni di piccole cellule in CM, a differenza del DCL extramidollare, hanno una natura a cellule T con un diverso rapporto di popolazioni CD4 + / CD8 +;
  • vera biclonalità. Coesistenza simultanea di due processi linfoproliferativi con diverse caratteristiche clonali immunomorfologiche e molecolari biologiche. Tali processi primo plurale sono anche chiamati compositi.

Nel lavoro svolto nel laboratorio immunologia ematopoietico RCRC dei martinetti, con discorde studio immunologico di linfoide piccole cellule infiltra pazienti DLBCL (20 pazienti) sufficientemente risultati interessanti sono stati ottenuti. In tutti i casi, gli infiltrati linfoidi sembravano essere rappresentati da cellule T reattive. Alcune osservazioni in studio immunoistochimico tra grandi cellule B componente T-determinato con segni di atypia palese, e l'immunoblast centroblasti come, che è stato considerato come i segni iniziali di midollo osseo invasione DLBCL. In questi casi il quadro immunologico KM corrispondeva DLBCL realizzazione ricco di cellule T (Fig. 10), mentre i tumori extramidollari in tutti i pazienti avevano DLBCL forma classica.


Fig. 10. IHH di infiltrazione linfatica a piccole cellule discordanti nel CM di un paziente con DLBC extranodale. a - colorazione per CD3 (componente T-cell); b - colorazione su CD20 (grandi cellule B anaplastiche discrete)

In un'analisi completa del decorso clinico del gruppo indagato, è stato stabilito che la tendenza alla formazione di gruppi di cellule T incontrato, principalmente in pazienti con primaria localizzato extranodale DLBCL. Pazienti con forme primarie nodali stato rilevato nel CM tipica esplosione infiltrazione diffusa corrispondente componente extramidollare DLBCL, e componente reattiva cellule T sono state presentate alcune cellule sparse (Fig. 11).


Fig. 11. Studio immunoistochimico del substrato leucemico KM nella DCL nodale primaria. e - colorazione su D20: crescita diffusa di un tumore di struttura a grandi cellule; b - colorazione per CD3: poche cellule T disperse. SW. 200

L'infiltrazione di linfoma a piccole cellule discordanti è stata scoperta da noi e in LB - con colorazione immunoistochimica del trepanobioptato KM, sembrava anche rappresentata dal componente T-reattivo (Fig. 12). La LB del paziente si è verificata sullo sfondo dell'infezione da HIV e l'infiltrazione delle cellule T è probabilmente la caratteristica della struttura sinciziale della malattia.


Fig. 12. Infiltrazione linfoide a piccole cellule discordanti di CM in LB. IHH, colorazione su CD3

Sul esempio di situazioni discordanti, è stato dimostrato che immunofenotipirovanie trepanobioptate KM prescindere dal loro valore puramente pratico può essere un interesse di ricerca. Ad esempio, la determinazione di cellule T natura reattiva linfoide piccole cellule infiltra in pazienti con primaria extranodale localizzata DLBCL può indicare elevata immunogenicità di questa forma linfoma rispetto nodale primario. Ulteriori studi sottopopolazioni di componente T-reattiva, così come il confronto delle due forme di DLBCL dell'immunofenotipo con vari immunogenicità possono chiarire i meccanismi di immunità antitumorale in neoplasie ematologiche e linfomi in generale.

IHH, come ogni altro metodo, ha, ovviamente, i suoi limiti. Ad esempio, mista cella (T-e cellule B) noduli linfoidi in periferico B-NHL precedentemente inequivocabilmente percepiti come reattivo, ma con lo sviluppo di tecniche di biologia molecolare è diventato possibile valutare separatamente taken un componente cellulare B. A causa di questo, una serie di pubblicazioni su analisi retrospettiva di archivistica biopsia materiale, in cui gli autori hanno sostenuto la natura clonale delle cellule B isolate dal "reattiva" si infiltra usando la reazione a catena della polimerasi (PCR) [85, 86]. Infatti, rispetto ai immunofenotipizzazione diagnostica molecolare, in particolare, la PCR è più preciso, consente di stimare il numero minimo di cellule linfoidi che determina le caratteristiche della sua applicazione - per la diagnosi di minima infiltrazione con CM staging all'inizio della malattia e per il monitoraggio remissione.

Quindi, possiamo dire che il trepanobiopata CM materiale di studio con l'uso di metodi moderni per la maggior parte di NHL è richiesto test per ottenere importanti informazioni diagnostiche aggiuntive che possono influenzare in modo critico le tattiche mediche pianificazione. Il più significativo deve essere considerato completo immunomorphological studio aspirare e trepanobioptate KM (utilizzando il metodo per HRC aspirato KM) che stabilisce i tumori extramidollari immunofenotipo componente (se presente) [27, 83, 87-90]. Nel Laboratorio di Immunologia della Emopoiesi e il Dipartimento di Anatomia Patologica delle Malattie del Tumore RAMS sviluppato un approccio integrato alla diagnosi, comprendente un esame istologico dettagliato del substrato primario NHL blocco di paraffina con immunoistochimica dettagliato nel materiale fresco (sezioni al criostato) e test citochimiche Immunomorfologichesky aspirati CM completato IHC trepanobioptate [91].

Materiale tratto dalla rivista "Oncohematology", №1-2, 2006.